PEMBAHASAN PRAKTIKUM SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL DENGAN PEREAKSI

PEMBAHASAN

Tujuan dari praktikum ini adalah untuk menetapkan kadar suatu obat dalam larutan tak berwarna yang diubah menjadi larutan berwarna dengan cara kompleksasi menggunakan alat spectrometer pada panjang gelombang daerah tampak (visible).

Spektrofotometri adalah pengukuran suatu interaksi antara radiasi elektromagnetik dan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Spektrofometri terdiri dari banyak macam, salah satunya adalah spektrofometri visible.

Pada spektrofotometri ini yang digunakan sebagai sumber sinar/energi adalah cahaya tampak (visible). Cahaya visible termasuk spektrum elektromagnetik yang dapat ditangkap oleh mata manusia. Panjang gelombang sinar tampak adalah 380 sampai 750 nm. Sehingga semua sinar yang dapat dilihat oleh kita, entah itu putih, merah, biru, hijau, apapun, selama ia dapat dilihat oleh mata, maka sinar tersebut termasuk ke dalam sinar tampak (visible).

Sumber sinar tampak yang umumnya dipakai pada spektro visible adalah lampuTungsten. Pada pembacaan absorbansi dengan spektrofotometer visible diperlukan larutan blanko yang berfungsi untuk meng 0 kan spektrofotometer. Larutan blanko merupakan larutan tidak berisi analit yang beperan sebagai larutan pembanding dalam analisa fotometri.

Sampel yang dapat dianalisa dengan metode ini hanya sample yang memiliki warna. Hal ini menjadi kelemahan tersendiri dari metode spektrofotometri visible. Oleh karena itu, untuk sample yang tidak memiliki warna harus terlebih dulu dibuat berwarna dengan menggunakan reagent spesifik yang akan menghasilkan senyawa berwarna. Reagent yang digunakan harus betul-betul speesifik hanya bereaksi dengan analat yang akan dianalisa. Selain itu juga produk senyawa berwarna yang dihasilkan harus benar-benar stabil.

Kadar obat yang akan ditetapkan pada praktikum ini adalah asam salisilat. Asam salisilat merupakan serbuk hablur ringan tidak berwarna atau berwarna putih. Agar dapat dianalisa dengan spektrofotometer visible maka larutan asam salisilat harus dibuat berwarna terlebih dahulu menggunakan reagent FeCl₃.

Asam salisilat akan membentuk kompleks warna ungu dengan penambahan FeCl₃. Hal ini terjadi karena atom O yang ada pada gugus OH dalam asam salisilat akan menyerang atom Fe dengan melepaskan atom H nya untuk membentuk ikatan O-FeCl₃ yang berwarna ungu.

Cara kerja yang dilakukan pada praktikum ini meliputi pembuatan larutan stok asam salisilat dengan konsentrasi 1000ppm, penentuan lamda max, penentuan operating time, pembuatan kuva baku dan perhitungan kadar asam salisilat dalam sample.

Pembuatan larutan stok bertujuan untuk menghindari penimbangan atau penaksiran berulang. Larutan stok dibuat dengan melarutkan 25mg asam salisilat pada campuran etanol dan air (1:9) sebanyak 25ml. etanol berfungsi untuk memudahkan proses pelarutan asam salisilat.

Penentuan lamda max dilakukan untuk mendspat serapan yang maksimum dengan mengukur absorbansi larutan asam salisilat pada rentang panjang gelombang di daerah visible. Saat penentuan lamda maksimal perlu diperhatikan hal-hal berikut : gugus kromofor, pelarut, gugus substituent pada kromofor dan geometri kromofor. Setelah diukur diperoleh lamda maksimal larutan asam salisilat yang diuji yaitu 462nm.

Penentuan operating time dilakukan untuk menentukan waktu sempurnanya reaksi yang ditunjukkan dengan tidak adanya lagi penurunan absorbansi. Setelah dilakukan penentuan operating time, diperoleh hasil bahwa operating time larutan asam salisilat yang kami uji adalah 5 menit.

Pembuatan kurva baku bertujuan untuk mengetahui hubungan antara konsentrasi larutan dengan nilai absorbansinya sehingga konsentrasi sampel dapat diketahui. Kurva baku dibuat dengan deret konsentrasi 50ppm, 60ppm, 70ppm, 80ppm dan 90ppm.

Hal terakhir yang dilakukan pada praktikum ini adalah pengukuran kadar asam salisilat pada sample. Penentuan kadar sampel dilakukan dengan metode regresi linier. Pengukuran kadar ini dilakukan dengan 3x replikasi. Sampel pertama memiliki kadar 52.74ppm, sampel kedua memiliki kadar 55.98ppm dan sampel ketiga memiliki kadar 52.63ppm. Sehingga kadar rata-rata sampel adalah 53,78ppm.

PEMBAHASAN PRAKTIKUM UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA BAHAN ALAM

PEMBAHASAN

Tujuan dari praktikum ini adalah agar mahasiswa dapat memahami prosedur penetapan aktivitas senyawa antibakteri dari suatu bahan obat alami. Bahan obat alami atau yang biasa disebut dengan simplisia adalah suatu bahan alami yang belum mengalami pengolahan apapun kecuali dinyatakan lain adalah bahan alam yang dikeringkan.

Pada praktikum ini simplisia telah dibuat dalam bentuk ekstrak dengan cara ekstraksi. Untuk tahap awal pelaksanaan uji aktivitas dari bahan alam, bentuk ekstrak lebih disukai karena mengandung senyawa aktif yang konsentrat melalui suatu proses ekstraksi.

Ekstrak yang akan diuji aktivitas antibakterinya pada praktikum ini adalah ekstrak jahe, ekstrak temulawak dan ekstrak sirih. Ekstrak-ekstrak tersebut diujikan aktivitas antibakterinya terhadap bakteri Staphylococcus aureus, Bacillus s.p dan Eschericia coli.

Uji aktivitas antibakteri dapat dilakukan dengan beberapa metode yaitu metode difusi dan metode pengenceran. Metode difusi sendiri dapat dilakukan dengan tiga cara yaitu metode silinder, metode sumuran dan metode cakram kertas. Metode yang digunakan pada praktikum ini adalah metode difusi dengan cara kertas cakram.

Metode difusi cakram prinsip kerjanya adalah bahan uji dijenuhkan ke dalam kertas cakram (cakram kertas). Cakram kertas yang mengandung bahan tertentu ditanam pada media perbenihan agar padat yang telah dicampur dengan mikroba yang diuji, kemudian diinkubasikan 37⁰C selama 24 jam. Area (zona) jernih disekitar cakram kertas diamati untuk menunjukkan ada tidaknya pertumbuhan mikroba. Selama inkubasi, bahan uji berdifusi dari kertas cakram ke dalam agar-agar itu dan sebuah zona inhibisi akan terbentuk. Sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter zona hambat yang terbentuk. Semakin besar diameternya maka semakin terhambat pertumbuhannya, Diameter zona sebanding dengan jumlah bahan uji yang ditambahkan ke kertas cakram.

Langkah pertama yang dilakukan pada praktikum ini adalah membagi tiap piring petri menjadi 4 sektor. Masing-masing sektor diberi paper disc dan kemudian ditetesi dengan ekstrak jahe, ekstrak temulawak, ekstrak sirih dan DMSO. DMSO adalah pelarut yang digunakan saat proses ekstraksi.

DMSO berfungsi sebagai control negative dan untuk memastikan apakah DMSO memiliki aktivitas antibakteri atau tidak. Volume ekstrak dan DMSO yang diteteskan ke paper disc sebanyak 10 mikroliter.

Setelah ditetesi dengan berbagai ekstrak dan DMSO, piring petri kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37^oC. Saat inkubasi piring petri diletakkan dalam keadaan terbalik dengan tujuan  untuk menghindari menetesnya air yang mungkin melekat pada dinding dalam pada tutup petri yang dapat mengakibatkan kontaminasi.

Setelah diinkubasi selama 24 jam kemudian diamati apakah terbentuk daerah zona hambat atau tidak. Daerah zona hambat yang terbentuk diukur diameternya dengan menggunakan jangka sorong. Semakin besar diameternya maka semakin poten antibiotik yang terkandung dalam ekstrak tersebut.

Setelah dilakukan pengamatan, hasilnya adalah tidak ditemukannya diameter zona hambat pada ketiga ekstrak baik pada media agar yang ditumbuhi bakteri Staphylococcus aureus, Bacillus s.p maupun Eschericia coli.

Secara teori Xanthorrhizol yang terkandung pada rimpang temulawak sangat bagus sebagai antimikroba dan antibakteri. Cara kerjanya adalah dengan memicu denaturasi protein sel bakteri, yang akan berakibat keluarnya protein dari sel, sehingga sel akan mengkerut dan mati. Bakteri-bakteri seperti streptococcus, actinomyces viscocus dan porphyromonas gingivalis dapat dibunuh dengan ekstrak temulawak. Sedangkan komponen antimikroba pada jahe yaitu gingerone dan gingerol merupakan senyawa dominan yang memiliki peran penghambatan terutama bakteri patogen seperti S. aureus serta Kandungan eugenol dan hidroksikavikol dalam daun sirih memiliki aktivitas antimikroba, dan kandungan lain seperti kavikol, kavibetol, tannin, karvakrol, kariofilen dan asam askorbat juga mempunyai aktivitas antibakteri.

Tidak terbentuknya daerah zona hambat pada media kemungkinan dapat disebabkan karena beberapa hal, antara lain yaitu:

-      Konsentrasi mikroba uji pada media agar terlalu banyak sehingga bakteri menjadi resisten terhadap antimikroba yang terdapat pada ekstrak dan daerah zona hambat tidak dapat terbentuk

-      Konsentrasi antimikroba ekstrak yang terdapat dalam cakram rendah sehingga antimikroba tidak cukup poten dan diameter zona hambat tidak terbentuk

-      Jenis antimikroba yang terdapat dalam ekstrak tidak cukup poten untuk ketiga bakteri tersebut.